NHS- Activated Magarose Beads 是一种预活化的琼脂糖磁性微球，可以直接用于含氨 基的蛋白

或多肽的耦联。预活化介质可以根据需要制备成特殊的亲和介质，快速有效地从复 杂体系中一步纯化

相应的物质。

2.1 Buffer 的准备

所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。

清洗液 :1mM HCl

偶联液 :0.2M NaHCO3，0.5M NaCl, pH8.0

封闭液：0.5M 乙醇胺，0.5M NaCl，pH8.3 或 0.1M Tris，pH8.5

清洗液 1：0.1M 乙酸-乙酸钠，0.5M NaCl，pH4.0

清洗液 2：0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl，pH8.0

保护液: 含 20%乙醇的 1XPBS

注：偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度

的盐离子减少非特异性吸附。

2.2 样品准备

样品用偶联液溶解或透析到偶联液中，浓度约 1-5mg/ml。

2.3 抗原偶联

1）将磁珠混合液在样品混合仪上振荡，充分混匀。取 500μl

NHS-Activated Magarose Beads 混合液（100ul 微球）于离心管中。

2）将离心管置于磁分离器上约 1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液。

注：不要抽掉磁珠。

3）将离心管从磁分离器上取下来，加入 500μl 的清洗液，使用枪头反复吹打

5-10 次，将 离心管置于磁分离器上，大约 1min，待溶液变澄清后，用移液器

吸弃清液，重复洗涤 1 次。

4）加入 500μl 的偶联液，混合均匀，注：活化磁珠不能在偶联液中时间过长

以免水解。

5）将的样品加入清洗好的 NHS- Activated Magarose Beads 中。

6）28℃振荡反应 2-4h 或 4 度过夜。注：确保磁珠反应过程中悬浮起来，

否则会大大影响 偶联效率。

7）反应完后收集偶联样品，以便检测偶联效率。去离子水清洗磁珠，加入

2 倍柱体积的封 闭液，28℃振荡反应 1h。如果样品反应过夜则不需要封闭。

将离心管置于磁分离器上，快速吸弃上清液。

8）用 500μl 的去离子水清洗磁珠，吸弃上清。清洗液 1、去离子水、清洗液 2

和去离子水 重复洗 2 次，然后保存在 500μl 的保护液中，于 2℃-8℃保存。