V5 广泛应用于蛋白定位和蛋白动力学分析。V5 Magnetic Beads 是 V5-tag antibody 与磁珠偶联，专门用于纯化和检测细胞裂解

液或菌体裂解液中的 V5 标签蛋白。适用于 IP/Co-IP 实验。当细胞或菌体裂解液与本试剂混合，样本中的V5 标签重组蛋白与

V5 Magnetic Beads 特异性结合，其他杂蛋白不结合。本试剂结构稳定，结合 V5 标签蛋白效率高。IP 产物可以应用于质谱分析、

酶活性测定等生化分析手段中。

本产品是特别制备的 V5 beads 产品，使用该产品进行 IP/Co-IP 实验，在后续的 IP-WB 步骤中，可以完全避免抗体轻重链的条

带出现。

IP

1.收集细胞：

对于一个免疫共沉淀反应 ，推荐使用 106-107 个表达 V5 融合蛋白的哺乳动物细胞。吸出培养液， 加 1ml 预冷 PBS 于细胞中并

刮下细胞，之后将细胞转入预冷管中。4℃，500g 离心 3 分钟，弃上清液。用预冷 PBS 洗两遍细胞沉淀物，轻轻重悬细胞。

2. 裂解细胞：

(1)用 200μl 预冷的 Lysis buffer 重悬细胞．

注：在Lysis buffer 中加入蛋白酶抑制剂（推荐使用cocktail 类型的蛋白酶抑制剂，货号A10004：200X 蛋白酶抑制剂复合物）

(2)将离心管放在冰上30 分钟，每10 分钟重悬一次细胞。

(3) 16000g，4℃离心10 分钟，将上清转移到一个新的预冷离心管中，加300μ1 dilutionBuffer,丢掉沉淀。

注：在这步细胞溶解物可放入-80℃长期保存。同样需要在在dilution buffer 中加入蛋白酶抑制剂。

3.平衡磁珠：涡旋V5 Magnetic Beads，吸取70μ1（35ul 纯磁珠）放在1.5ml 离心管中。加入1ml 预冷PBST，手拿上下晃动

60 秒，不要太剧烈。放入磁力架静置分离磁珠60 秒，直到上清液澄清，丢掉上清液，重复3 次。

4.结合蛋自：

(1) 在平衡好的磁珠中加入细胞裂解液500μl。

(2) 在 4℃用翻转摇床旋转 1 小时。A

5.洗涤：

(1)用磁力架静置分离磁珠，直到上清液澄清，丢弃上清液。（如有需要，可取50μ1 上清液作为input 对照用于兔疫印迹分析）

(2)再加1ml 预冷PBST 悬浮磁珠。

(3)磁力架静置分离磁珠，丢弃上清液，重复此步骤至少4 次。

6.洗脱结合蛋白：

(1)除去上清液之后，用 40μl SDS loading buffer 重悬磁珠。

(2)将磁珠在 95℃中加热 10 分钟，使免疫复合物分离出来。用磁力架静置分离磁珠， 取上清跑 SDS-PAGE。

(3)如果后续 IP 产物需要进行质谱鉴定，可以使用以下方法来替代步骤（1）和（2）：按照 40 μl 0.2M,PH2.5 的甘氨酸-盐酸，

里面加 10ul 的 10%的 SDS，使用这个混合液 50-200μl 重悬磁珠（使用量取决于 beads 沉淀体积，一般 2-3 倍），保持混匀

状态孵育 30s,用磁力架静置分离磁珠。将上清转移至新的离心管中，加入 5μl lM PH10.4 的 Tris base 中和。A

IP

储存于4°C，禁止冻存。

保质期12 个月。

IP 1:50

#M20001 His-Tag (2A8) Mouse mAb

#M20002 Myc-Tag (19C2) Mouse mAb

#M20003 HA-Tag (26D11) Mouse mAb

#M20004 GFP-Tag (7G9) Mouse mAb

#M20007 GST-Tag (12G8) Mouse mAb

#M20008 DYDDDDDK-Tag (3B9) Mouse mAb (Binds to same epitope as Sigma s Anti-FLAG M2 Antibody)

#M20012 Anti-Myc-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)

#M20013 Anti-HA-Tag Mouse mAb (Agarose Conjugated)

#M20018 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Agarose Conjugated) (Same as Sigma s Anti-FLAG M2)

#M20118 Anti-DYKDDDDK-Tag Mouse Antibody (Magnetic Beads) (Same as Sigma s Anti-FLAG M2)